轉化生長因子beta(TGF beta)家族的細胞因子無處不在,具有多種功能,對生存至關重要。它們在生長、發(fā)育、炎癥、修復和宿主免疫中發(fā)揮著核心作用。哺乳動物的TGF beta異構體(TGF beta 1、beta 2 和 beta 3)作為潛在的前體分泌,擁有多種細胞表面受體,并產(chǎn)生至少兩種介導信號轉導的受體。
實驗步驟:
1.細胞培養(yǎng)
(以6孔板為參考,其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實驗需要進行適當調(diào)整。)每孔1x10^5-3x10^6細胞接種于6孔板中,培養(yǎng)至正常生長階段。
注:細胞接種量,可根據(jù)細胞大小、生長速度、以及實驗處理周期等調(diào)整。
2.細胞干預或者處理
(選做)可以根據(jù)實驗需要對細胞進行藥物或者其他刺激干預處理。
3.細胞共孵育培養(yǎng)
根據(jù)預實驗結果,用細胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液,或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細胞共同孵育,同時設置不添加組作為陰性對照組。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h,去除舊培養(yǎng)液。
更簡單:無需抗原抗體反應,基于小分子化學反應的檢測方法簡單高效,反應僅需要幾分鐘。
更靈敏:無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測。
更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟,完成整個檢測周期僅需2.5小時。
更準確:無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整。
更兼容:對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特征。